Questions fréquentes

• Comment se développent le cancer du col de l’utérus et les lésions qui le précèdent?
• Qu’est-ce que le HPV?
• Qu’est-ce que les HPV à haut risque et à faible risque?
• Que détecte un test de HPV basé sur l’ADN?
• Que détecte un test de HPV basé sur les anticorps visant les protéines de la capside virale?

• Qu`est-ce que p16^INK4a?
• Y a-t-il des différences de marquage de p16^INK4a entre les cellules dysplasiques ou néoplasiques où le génome de HPV est épisomique et les cellules où l’ADN du HPV est intégré dans l’ADN chromosomique des cellules hôtes?
• Quelle est la différence entre la détection de p16^INK4a et la détection de Ki67?
• Pourquoi utiliser les kits CINtec® plutôt qu’un anticorps unique?

• Les tests CINtec® Histology et CINtec® Cytology sont-ils interchangeables?

• Que détecte le CINtec® Cytology Kit?
• Peut-on utiliser le CINtec® Cytology Kit pour détecter le virus HPV?
• Les tests CINtec® Histology et CINtec® Cytology sont-ils interchangeables?

• Dans quelles conditions faut-il conserver les kits CINtec®?
• Quel est le système de détection compris dans les kits CINtec®?
• Quel est le type de pré-traitement fourni?
• Quel est le chromogène fourni (DAB, AEC ou autre)?
• Quel type de tampon de lavage faut-il utiliser pour les étapes de lavage? Le tampon de lavage est-il compris dans les kits?
• Combien de tests peut-on réaliser avec chaque kit?

• Avec quels systèmes les produits CINtec® sont-ils compatibles?
• Le contenu des kits est-il disponible sous forme concentrée, ou uniquement en prêt à l’emploi?

Comment se développent le cancer du col de l’utérus et les lésions qui le précèdent?
On enregistre quelque 450 000 nouveaux cas de cancer du col de l’utérus par an dans le monde. Ce cancer se développe lentement, en passant par une succession de stades précurseurs. Un lien de cause à effet a été démontré entre les souches à haut risque de papillomavirus (HR-HPV) et la pathogenèse du cancer du col et des lésions précurseurs.

Qu`est-ce que le HPV?
Les papillomavirus humains (HPV) composent un groupe de virus étroitement apparentés, qui infectent les épithéliums squameux stratifiés de la peau et des muqueuses et provoquent une prolifération cellulaire aboutissant, par exemple, à la formation de verrues (peau) ou de condylomes (muqueuses). On connaît actuellement une centaine de types de HPV, définis sur la base de leur homologie de séquence d’ADN. Il est reconnu que 23 types au moins infectent l’épithélium cervical. Les infections anogénitales sont généralement transmises par voie sexuelle. On retrouve des infections à HPV chez près de 30 % des femmes de moins de 30 ans. Dans la grande majorité des cas, les infections à HPV disparaissent sans s’être manifestées. Chez un petit pourcentage de femmes, toutefois, l’infection persiste et les types de virus oncogènes peuvent produire leur effet.

Qu’est-ce que les HPV à haut risque et à faible risque?
On distingue deux types de HPV infectant les muqueuses, en fonction de leur aptitude à transformer les cellules. Les HPV à haut risque (16, 18, 31, 35, 45, etc.) peuvent provoquer des dysplasies et des cancers du col de l’utérus, tandis que les HPV à faible risque (par ex. 6, 11, 40 et 42) ne causent qu’exceptionnellement des remaniements cellulaires. Les produits des gènes E6 et E7 des HPV à haut risque sont les médiateurs du potentiel oncogène de ces virus.

Que détecte un test de HPV basé sur l`ADN?
Un test de HPV positif met en évidence une infection par le virus. Dans la mesure où la plupart de ces infections sont éliminées par le système immunitaire sans provoquer de cancer ou de lésions précurseurs, un test positif indique simplement que la femme concernée a un risque légèrement plus élevé (par rapport à la population totale des femmes) de développer une lésion précancéreuse ou un cancer du col.

Que détecte un test de HPV basé sur les anticorps visant les protéines de la capside virale?
Certains tests du HPV se basent sur la détection des antigènes de la capside virale. La réplication du virus se déroule habituellement dans des kératinocytes différenciés. Sous l’action des protéines virales, la cellule hôte fournit tous les composants nécessaires à la construction de nouvelles particules infectieuses. Les protéines de la capside virale sont donc exprimées dans les cellules épithéliales en voie de différenciation. Lors de la carcinogenèse provoquée par le HPV, les processus cellulaires normaux, tels que la différenciation, sont très perturbés ; le virus ne peut pas se propager correctement pendant la transformation. L’expression des protéines de la capside virale est donc rarement détectée dans les lésions de haut grade et les cancers invasifs du col de l`utérus, alors même que l’on y retrouve le matériel génétique de l`HPV. La détection des protéines de la capside virale signale plutôt une infection aiguë par l’HPV, tandis que la surexpression de p16^INK4a est un marqueur d’infection par un HPV transformant.

Qu`est-ce que p16<sup>INK4a</sup>?
p16<sup>INK4a</sup> est un inhibiteur de la kinase cycline-dépendante. Cette protéine joue un rôle clé dans le contrôle médié par la protéine du rétinoblastome (pRB) de la phase de transition G1-S du cycle cellulaire. Une perte d`expression ou une inactivation fonctionnelle de p16^INK4a a été mise en évidence dans de nombreuses tumeurs. À l`inverse, une forte surexpression de p16<sup>INK4a</sup> a été rapportée dans certains autres cancers tels que le cancer du col de l`utérus.

Y a-t-il des différences de marquage de p16^INK4a dans les cellules dysplasiques ou néoplasiques où le génome du HPV est épisomique et les cellules où l`ADN du HPV est intégré dans l`ADN chromosomique des cellules hôtes?
Aucune différence notable n`a été observée à ce jour dans les schémas de marquage de p16<sup>INK4a</sup> selon si l`ADN de l`HPV est épisomique ou intégré. Dans la carcinogenèse liée à l`HPV, les perturbations du pôle du fuseau dans les cellules en prolifération constituent un phénomène bien connu. On estime qu`elles favorisent fortement la rupture et la recombinaison de chromosomes, aboutissant à l`intégration de l`ADN épisomique dans le génome de l`hôte. La surexpression de p16^INK4a devrait cependant être détectée dans tous les cas, que le génome de l`HPV soit intégré ou épisomique.

En quoi la détection de p16^INK4a est-elle différente de celle de Ki67?
p16^INK4a est une protéine cellulaire qui est surexprimée de manière significative lors de remaniements cellulaires oncogènes provoqués par les HR-HPV; elle est donc liée à l’apparition de la maladie. Ki67, en revanche, est un antigène associé à la prolifération et un marqueur de prolifération cellulaire; il ne fait pas de différence entre la prolifération cellulaire normale ou pathologique. Les différences entre les deux méthodes de test sont évidentes, aussi bien du point de vue des schémas de marquage que du type de cellules marquées, puisque Ki67 marque aussi les cellules inflammatoires.

Pourquoi utiliser les kits CINtec® plutôt qu’un anticorps unique?
Le choix d’un anticorps pour détecter p16^INK4a doit se fonder sur plusieurs facteurs de réflexion. Les kits CINtec® donnent de meilleurs résultats que les anticorps de laboratoire et apportent aux praticiens les avantages suivants :

• Le clone d’anticorps E6H4^TM a été spécialement conçu et sélectionné en vue d’une détection sensible et spécifique de la surexpression de p16^INK4a dans les coupes de tissu fixées au formol et incluses dans la paraffine aussi bien que dans les préparations de cytologie cervicales fixées à l’alcool. La spécificité et les performances du clone d’anticorps optimisé E6H4^TM ont été démontrées par de nombreuses publications cliniques dans des revues à comité de lecture.
• Le procédé simple, en deux étapes, est validé pour fournir un test reproductible et cliniquement pertinent.
• La fabrication conforme aux bonnes pratiques reconnues assure la fiabilité de chaque lot. Les produits sont validés selon le marquage CE en Europe et commercialisés aux États-Unis comme des IVD (diagnostics in vitro) de Classe 1.
• Le coût des différents anticorps, des réactifs secondaires, du travail supplémentaire, des validations répétées et des autres réactifs auxiliaires doit être pris en compte dans le prix, de même que celui des autres composants.
• mtm laboratories a entrepris de vastes essais cliniques afin de démontrer l’utilité clinique majeure des produits CINtec®.

Les tests CINtec® Histology et CINtec® Cytology sont-ils interchangeables?
Non. Il s’agit de produits différents, employant des protocoles différents, et les résultats ne seront pas les mêmes si vous les intervertissez. Chaque réactif a été développé et optimisé spécifiquement pour le test correspondant :

• CINtec® Histology pour les pièces de biopsie
• CINtec® Cytologie pour les échantillons de cytologie

Que détecte le CINtec® Cytology Kit?
Le kit marque les cellules surexprimant p16^INK4a dans les échantillons cytologiques cervico-utérins. Les échantillons sont recueillis à l’aide d’un dispositif de prélèvement et étalés sur lame de verre selon la méthode habituelle, ou préparés selon la technique LBC (cytologie en milieu liquide).

Peut-on utiliser le CINtec® Cytology Kit pour la détection de l’HPV?
Non. p16^INK4a est une protéine cellulaire et non une protéine virale.
L’infection par l’HPV est très fréquente. Elle est généralement transitoire et spontanément résolutive en quelques mois. Un petit pourcentage seulement des infections persiste assez longtemps pour que le potentiel oncogène des HR-HPV puisse se manifester.La réplication du virus se déroule normalement dans les kératinocytes en voie de maturation qui ne se divisent pas. Ces cellules se différencient ; elles ne prolifèrent pas et ne permettent pas aux oncogènes d’entraver la régulation du cycle cellulaire. Toutefois, dans quelques cas, les oncogènes viraux peuvent s’exprimer, selon des mécanismes encore inconnus, dans des cellules basales non différenciées de l`épithélium cervical capables de réplication. Des lésions précancéreuses et néoplasiques peuvent alors se former. Seule l`expression de l’oncogène E7 dans ces cellules capables de réplication entraîne une dyscaryose (ou dysplasie) dans l`épithélium cervical, qui est accompagnée d’une surexpression de p16^INK4a.

Les tests CINtec® Histology et CINtec® Cytology sont-ils interchangeables?
Non. Il s’agit de produits différents, employant des protocoles différents, et les résultats ne seront pas les mêmes si vous les intervertissez. Chaque réactif a été développé et optimisé spécifiquement pour le test correspondant :

• CINtec® Histology pour les pièces de biopsie
• CINtec® Cytology pour les échantillons de cytologie

Dans quelles conditions faut-il conserver les kits CINtec®?
Les kits CINtec® doivent être conservés au réfrigérateur entre 2 et 8°C.

Quel est le système de détection compris dans les kits CINtec®?
Les kits CINtec® de mtm laboratories constituent une méthode en deux temps mettant en œuvre un conjugué de réactifs polymère et de peroxydase de raifort pour la génération du signal..

Quel est le type de pré-traitement fourni?
Les kits CINtec® comprennent une étape de récupération des épitopes à l’aide de solutions de récupération spécifiques, fournies avec les kits. Le protocole validé pour le kit comprend une incubation de 10 minutes à 95°C au bain-marie.

Quel est le chromogène fourni (DAB, AEC ou autre)?
Le chromogène DAB est fourni ; c’est un système à deux composants qui sert à préparer la solution de chromogène DAB de travail.

Quel type de tampon de lavage faut-il utiliser pour les étapes de lavage? Le tampon de lavage est-il compris dans les kits?
Le tampon de lavage est un tampon à base de Tris/HCl (pH 7,6) concentré 10 fois, avec un détergent et un agent antimicrobien. Ce produit est fourni par unités d’un litre dans des flacons adaptés. Le tampon de lavage est fourni séparément pour être utilisé avec le kit. Il n’est pas inclus dans la boîte du kit CINtec® mais expédié parallèlement pour chaque kit commandé.Il est possible, si nécessaire, de commander un réapprovisionnement en tampon de lavage, qui sera expédié séparément du kit CINtec®.

Combien de tests peut-on réaliser avec chaque kit?
Le CINtec® Histology Kit contient suffisamment de réactifs pour 50 lames marquées pour la recherche de p16^INK4a et 50 lames marquées avec le Réactif de contrôle négatif. Le CINtec® Cytology Kit contient 50 tests sans contrôles supplémentaires. Le nombre de tests par kit se base sur un volume estimé de 200 µl de réactifs utilisés pour chaque lame.

Avec quels systèmes les produits CINtec® sont-ils compatibles?
Les produits CINtec® sont compatibles avec les systèmes suivants :

• immunomarquage manuel
• Autostainer (Labvision, Dako)
• Ventana Benchmark

Le contenu des kits est-il disponible sous forme concentrée, ou uniquement en prêt à l`emploi?
Les réactifs primaires aux anticorps, à savoir l`anticorps monoclonal E6H4^TM spécifique de p16^INK4a et l`anticorps isotype de contrôle utilisé comme contrôle négatif (CINtec® Histology Kit), de même que le réactif secondaire, se présentent sous la forme de solutions prêtes à l`emploi. La quantité d`anticorps contenue dans le kit se base sur une estimation de 200 µl par test. Le tampon de lavage et le tampon de récupération des épitopes sont des solutions concentrées 10 fois, à diluer avec de l`eau.