P+ F - Preguntas más frecuentes

• ?Cómo se desarrolla el cáncer cervical y sus lesiones precursoras?
• ?Qué es el VPH?
• ?Cuáles son los VPH de alto riesgo y de bajo riesgo?
• ?Qué se detecta con una prueba de ADN del VPH?
• ?Qué se detecta con una prueba de VPH basada en anticuerpos frente a proteínas de la cápside viral?

• ?Qué es la p16^INK4a?
• ?Hay diferencias en el patrón de tinción de la p16^INK4a en células displásicas o neoplásicas en las que el genoma VPH es episomal, en contraste con las células en las que el VPH-ADN está integrado en el ADN cromosomal de las células hospedadoras?
• ?En qué se diferencia la detección de p16^INK4a de la de Ki67?
• ?Por qué utilizar kits CINtec® en lugar de un vial independiente con Anticuerpo?

• ?Se pueden utilizar CINtec® Histology y CINtec® Cytology de manera indistinta?

• ?Qué se detecta con el CINtec® Cytology Kit?
• ?Se puede utilizar el CINtec® Cytology Kit para la detección del VPH?
• ?Se pueden utilizar CINtec® Histology y CINtec® Cytology de manera indistinta?

• ?Cuáles son las condiciones de almacenamiento adecuadas para los kits CINtec®?
• ?Qué sistema de detección incluyen los kits CINtec®?
• ?Qué tipo de tratamiento previo se incluye?
• ?Qué cromógeno se incluye (DAB, AEC o algún otro)?
• ?Qué tipo de tampón de lavado se necesita para los pasos de lavado, o se incluye en los kits?
• ?Cuántas pruebas se proporcionan por cada kit?

• ?Qué plataformas son compatibles con los productos CINtec®?
• ?Los contenidos del kit se encuentran disponibles en forma concentrada o en una forma lista para usar?

?Cómo se desarrolla el cáncer cervical y sus lesiones precursoras?
Cada año se producen 450.000 nuevos casos de cáncer cervical en todo el mundo. El cáncer cervical se desarrolla gradualmente durante un largo período de tiempo mediante una secuencia de lesiones precursoras. Se ha demostrado que las infecciones persistentes con virus del papiloma humano de alto riesgo (VPH-AR) tienen una implicación causal en la patogénesis del cáncer cervical y en sus lesiones anteriores.

?Qué es el VPH?
Los virus del papiloma humano (VPH) son un grupo de virus íntimamente relacionados que infectan el epitelio escamoso estratificado mucoso y cutáneo, produciendo la proliferación de células hospedadoras que podrían producir, por ejemplo, verrugas genitales o condilomas acuminados. Actualmente se conocen unos 100 tipos de VPH, definidos en función de la homología de secuencia del ADN. Se ha demostrado que como mínimo son 23 los tipos de VPH que pueden infectar el epitelio cervical. Las infecciones anogenitales son de transmisión sexual, y en mujeres menores de 30 años, se detecta la infección por VPH hasta en un 30% de ellas. La gran mayoría de infecciones por VPH desaparecen por sí solas sin presentar síntomas. Sin embargo, en un pequeño porcentaje de mujeres, la infección persiste, y el potencial oncogénico de algunos virus puede desarrollarse.

?Cuáles son los VPH de alto riesgo y de bajo riesgo?
En función de su capacidad para transformar células, se han definido dos grupos de riesgo del VPH en la mucosa. Los VPH de alto riesgo (por ejemplo: 16, 18, 31, 35, 45 y otros) tienen la capacidad de causar displasia y carcinomas cervicales, mientras que los VPH de bajo riesgo (por ejemplo: 6, 11, 40 y 42) muestran capacidades de transformación sólo en casos excepcionales. Los productos de los genes E6 y E7 del VPH de alto riesgo median en el potencial oncogénico de estos virus.

?Qué se detecta con una prueba de ADN del VPH?
Una prueba de VPH positiva demuestra una infección con el virus. Debido a que la mayoría de las infecciones se curan gracias al sistema inmunológico y, por tanto, no producen cáncer cervical o sus lesiones percusoras, una prueba de VPH positiva sólo proporciona una indicación de que la mujer tiene un riesgo absoluto ligeramente más alto (en comparación con la población femenina total) de desarrollar una lesión preneoplásica o cáncer cervical.

?Qué se detecta con una prueba de VPH basada en anticuerpos frente a proteínas de la cápside viral?
Algunas pruebas de VPH se basan en la detección de antígenos de cápside viral. La replicación viral normalmente se produce en queratinocitos diferenciados. Bajo la influencia de las proteínas virales, las células hospedadoras proporcionan todos los componentes necesarios para la formación de nuevas partículas infecciosas. Por tanto, las proteínas de cápside viral se expresan en células epiteliales en fase de diferenciación. En la carcinogénesis relacionada con el VPH, los procesos celulares normales, como por ejemplo la diferenciación, se alteran profundamente, y a medida que se produce la transformación, se previene la propagación viral. Por consiguiente, la expresión de las proteínas de cápside viral en lesiones de alto grado y en carcinomas cervicales invasivos no se suelen detectar aunque se encuentre el material genético del VPH. La detección de las proteínas de cápside viral es más característica de una infección aguda de VPH, mientras que la sobreexpresión de p16^INK4a es un indicador de una infección de VPH en transformación.

?Qué es la p16^INK4a?
La p16^INK4a es un inhibidor de la quinasa dependiente de ciclina. Esta proteína desempeña un papel crucial en el control mediado por la proteína retinoblastoma pRB de la fase G1-S de transición del ciclo celular. Se ha demostrado una pérdida de expresión de p16^INK4a o una inactivación funcional de p16^INK4a en un número elevado de entidades tumorales. Por otro lado, en algunos tumores, entre los que se incluye el cáncer cervical, se ha demostrado una fuerte sobreexpresión de p16^INK4a.

?Hay diferencias en el patrón de tinción de la p16^INK4a en las células displásicas o neoplásicas en las que el genoma VPH es episomal, en contraste con las células en las que el VPH-ADN está integrado en el ADN cromosomal de las células hospedadoras?
No hay pruebas de diferencias en patrones de tinción de p16^INK4a relacionados con el VPH episomal, al contrario que en las formas integradas de VPH-ADN conocidas hasta el momento. En la causa de la carcinogénesis relacionada con el VPH, las alteraciones en el polo del huso mitótico de las células que proliferan son un fenómeno muy conocido. Esto se considera un promotor potente de la ruptura cromosomal y la recombinación que produce la integración del ADN viral episomal en el genoma hospedador. Sin embargo, la sobreexpresión de p16^INK4a debería detectarse con independencia de si el genoma VPH es integrado o episomal.

?En qué se diferencia la detección de p16^INK4a de la de Ki67?
La p16^INK4a es una proteína celular que está sobreexpresada de manera significativa durante la transformación oncogénica celular del VPH-AR, y por tanto, está relacionada con el desarrollo de la enfermedad. Por el contrario, Ki67 es un antígeno relacionado con la proliferación, y un marcador para la proliferación celular (sin diferenciar entre proliferación de célula sana y nociva). Las diferencias entre los dos métodos de prueba son evidentes tanto en el patrón de tinción, como en el tipo de células con tinción, es decir: Ki67 también tiñe las células inflamatorias.

?Por qué utilizar kits CINtec® en lugar de un vial independiente con Anticuerpo?
Antes de decidir la utilización de un anticuerpo para detectar la p16^INK4a, es importante considerar una serie de factores. Los kits CINtec® son superiores a los anticuerpos obtenidos en laboratorios y permitirán que un médico clínico se beneficie de lo siguiente:

• El anticuerpo clon E6H4^TM ha sido específicamente diseñado y seleccionado para permitir una detección específica y sensible de la sobreexpresión de p16^INK4a tanto en cortes de tejido incluidos en parafina y fijados con formol como en preparaciones de citologías cervicales fijadas con alcohol. La especificidad y el rendimiento de este anticuerpo optimizado, clon E6H4^TM, se ha demostrado en multitud de publicaciones clínicas.
• Muy sencillo. Un proceso de 2 pasos validados para proporcionar un resultado reproducible y que sea clínicamente relevante.
• Fabricación conforme a las normas GMP para garantizar la fiabilidad de cada lote. Los productos cuentan con la marca CE en Europa, y se comercializarán como IVD (diagnóstico in vitro) de Clase 1 en EE.UU.
• El coste de los anticuerpos sólos, reactivos secundarios, carga de trabajo adicional, repetición de validaciones y otros reactivos auxiliares, deben considerarse incluidos en el precio, al igual que otros componentes.
• mtm laboratories realiza pruebas clínicas exhaustivas para demostrar la significativa utilidad clínica de los productos CINtec®.

?Se pueden utilizar CINtec® Histology y CINtec® Cytology de manera indistinta?
No. Son productos diferentes con protocolos diferentes, y los resultados no serán los mismos si se utilizan indistintamente. Cada reactivo ha sido diseñado específicamente y optimizado para su aplicación:

• CINtec® Histology en biopsias de tejido
• CINtec® Cytology en muestras de citología

?Qué se detecta con el CINtec® Cytology Kit?
El kit detecta las células con una sobreexpresión de p16^INK4a en las muestras de citología del cuello uterino. Las muestras se toman con el dispositivo de muestreo y se colocan en el cristal del portaobjetos de la manera convencional, o se preparan con la tecnología de citología en base líquida (BLC).

?Se puede utilizar el CINtec® Cytology Kit para la detección del VPH?
No. La p16^INK4a es una proteína celular, no una proteína viral.
La infección del VPH es bastante común. En la mayoría de los casos, la infección es transitoria y se cura de manera espontánea en unos meses. Sólo un pequeño porcentaje de las infecciones persisten, y el potencial oncogénico del VPH-AR puede llegar a desarrollarse. Normalmente, la replicación viral se produce en queratinocitos que no se dividen y que se encuentran en maduración. Estas células se diferencian; no proliferan y no proporcionan ninguna oportunidad para que los oncogenes interfieran en la regulación del ciclo de la célula. Sin embargo, debido a mecanismos aún desconocidos, en algunos casos los oncogenes virales se expresan en células basales no diferenciadas y competentes para la replicación, y se pueden producir lesiones preneoplásicas y neoplásicas. Sólo la expresión del oncogén viral E7 en estas células competentes para la replicación producirá displasia en el epitelio cervical, y se puede encontrar la sobreexpresión de p16^INK4a.

?Se pueden utilizar CINtec® Histology y CINtec® Cytology de manera indistinta?
No. Son productos diferentes con protocolos diferentes, y los resultados no serán los mismos si se utilizan indistintamente. Cada reactivo ha sido diseñado específicamente y optimizado para su aplicación:

• CINtec® Histology de biopsias de tejido
• CINtec® Cytology en muestras de citología

?Cuáles son las condiciones de almacenamiento adecuadas para los kits CINtec®?
Los kits CINtec® deben conservarse a una temperatura de refrigeración de 2 a 8 grados centígrados.

?Qué sistema de detección incluyen los kits CINtec®?
Los kits CINtec® de mtm laboratories proporcionan un protocolo de dos pasos basado en un reactivo de polímero conjugado con peroxidasa de rábano picante para la generación de la señal.

?Qué tipo de tratamiento previo se incluye?
Los kits CINtec® incluyen un paso de recuperación del epítopo inducido por calor con una solución de recuperación del epítopo específica que se incluye en el kit. El protocolo validado para el kit utiliza un período de incubación de 10 min. a 95 grados Celsius al baño maría.

?Qué cromógeno se incluye (DAB, AEC o algún otro)?
El cromógeno que se incluye es DAB. En el kit se proporcionan dos soluciones que se utilizan para preparar la solución definitiva de trabajo del cromógeno DAB.

?Qué tipo de tampón de lavado se necesita para los pasos de lavado, o se incluye en los kits?
El tampón de lavado es un tampón con base Tris/HCl (pH 7,6) y concentrado 10 veces con detergente y agente antimicrobial. El producto se proporciona en unidades de un litro en su botella correspondiente. Este tampón de lavado se proporciona como un producto por separado que se debe usar con el kit; no se encuentra en el paquete original de la caja del Kit CINtec®, sino que se envía de forma paralela con cada Kit CINtec® que se solicita.
Si es necesario, se pueden solicitar y enviar por separado más botellas de tampón de lavado de manera independiente al Kit CINtec®.

?Cuántas pruebas se proporcionan por cada kit?
Para el CINtec® Histology Kit hemos incluido reactivos para 50 pruebas de tinción para p16^INK4a, así como 50 pruebas de tinción con reactivo de control negativo. CINtec® Cytology contiene 50 pruebas por kit sin controles adicionales. El número de pruebas por kit se basa en el cálculo de que se utilizan 200 µL de reactivos por cada portaobjetos.

?Qué plataformas son compatibles con los productos CINtec®?
Los productos CINtec® son compatibles con las siguientes plataformas:

• Inmunotinción manual
• Autostainer (Labvision, Dako)
• Ventana Benchmark

?Los contenidos del kit se encuentran disponibles en forma concentrada o en una forma lista para usar?
Los reactivos de anticuerpos primarios, que son los anticuerpos monoclonales E6H4^TM específicos para p16^INK4a y el anticuerpo de control del isotipo que se utiliza como reactivo de control negativo (CINtec® Histology Kit), así como el reactivo secundario, son soluciones listas para usar. La cantidad de anticuerpo en el kit se calcula en 200 µL por prueba. El tampón de lavado y el tampón de recuperación del epítopo son soluciones concentradas 10 veces para ser diluidas en agua.